Table des matières
Comment insérer un gène?
L’ADN humain ainsi que le plasmide doivent être coupés avec les mêmes ciseaux de manière à ce que leurs extrémités se complémentent. A l’aide de colle à ADN, les ligases, les extrémités sont liées ensemble. Il en résulte un anneau d’ADN recombinant: un plasmide bactérien contenant un gène humain.
Comment extraire un gène?
On commence en général par une lyse des cellules ou des tissus, consistant éventuellement en un broyage, suivi d’une extraction par des détergents, qui vont disperser les bicouches lipidiques des membranes et dénaturer les protéines, et en particulier celles qui sont associées à l’ADN dans la chromatine.
Comment insérer un gène dans un plasmide?
L’insertion d’une séquence d’ADN bicaténaire dans un plasmide nécessite un traitement préalable par une enzyme de restriction. On choisit une enzyme qui a un site unique dans la séquence plasmidique. Après action de l’enzyme de restriction, le plasmide circulaire est linéarisé.
Comment procéder au clonage d’un gène?
Le clonage d’un gène s’effectue en plusieurs étapes comprenant la purification du gène d’intérêt d’un organisme donné suivie de son transfert dans une cellule hôte capable alors de produire de grande quantité de la protéine recombinante. Cliquer sur ou pour lire our stopper l’animation.
Quel est le clone d’un bactérien?
Un clone sera le transformant bactérien qui contient ce plasmide particulier. Dans ce cas on parle de clone car tous les individus de la colonie bactérienne sont génétiquement identiques. Le clonage moléculaire est donc différent du clonage reproductif (créer un individu génétiquement identique à un autre mais d’un age différent)…
Comment se joue le clonage?
C’est alors ici que tout se joue. Le clonage consiste à isoler un ovule auquel on lui retire son noyau avec une très fine aiguille. Cette étape permet de retirer la part d’ADN de la mère déjà présente dans l’ovule. Ensuite, on prélève le noyau d’une cellule de l’individu à cloner.
Comment fonctionne le clonage moléculaire?
Le clonage moléculaire nécessite des enzymes de restrictions capables de couper l’ADN ( exp2 ), et de l’ADN ligase capable de recoller les fragments d’ADN. La ligase a été isolée pour la première fois à partir du bactériophage T4. Cette enzyme est impliquée dans la réparation et la réplication de l’ADN.